近日，畜牧兽医所畜禽重大疫病防控创新团队与合作者在国际免疫学经典学术期刊Journal of Immunology（医学类Top期刊）以亮点文章的形式发表了题为“Efficient Identification of Tembusu Virus CTL Epitopes in Inbred HBW/B4 Ducks Using a Novel MHC Class I-Restricted Epitope Screening Scheme”(https://doi.org/10. 4049/jimmunol.2100382)的研究论文，报道了一种全新的MHC class I分子限制性CTL表位的高效筛选体系。
       T细胞免疫是宿主消除病毒的重要手段，也是疫苗研发的重要方向。MHC class I限制性表位的鉴定是研究CTL抗病毒免疫反应的基础，但受限于MHC class I的高度多态性，利用现有技术进行特定物种特别是非哺乳动物CTL表位的鉴定仍然十分困难。为了突破这一行业难题，研究人员着手研发了一种基于随机肽库的MHC class I 分子多肽结合基序筛选方案，并以HBW/B4近交系鸭（表达Anpl-UA A*76）和鸭坦布苏病毒（Tembusu virus, TMUV）进行了展示。
       新筛选方案主要由四部分组成。首先，利用RPLD-MS鉴定Anpl-UAA*76的限制性多肽基序。结果显示（图1），P2与P9位为Anpl-UAA*76的锚定位，偏好性氨基酸分别为R和L/V/I。

       第三，体外验证候选多肽的准确性。对Anpl-UA A*76和保守多肽进行体外共复性并解析复合体蛋白精细结构，以明确锚定位的作用强度和多肽递呈的结构基础，验证筛选方法的准确性。结果如图2所示，11条保守多肽均能成功复性，P2与B口袋的作用力最强，是主要锚定位，其中Asp³⁴对多肽结合起到重要选择作用。


       最后，体内验证保守多肽的免疫原性。利用保守多肽制备的Anpl-UAA*76四聚体进行特异性 T 细胞的定量检测，同时进行PBMC受多肽刺激后分泌IFN-γ和增殖能力的检测。结果如图3，所选多肽能够激发机体较强的T细胞免疫反应。
       该方案能够一次性完成锚定位及锚定残基明确的高亲和力、功能性CTL表位的鉴定，为从物种水平高效筛选MHC class I 分子限制性CTL表位和T细胞表位疫苗的研发提供了突破性的工具。
       畜牧兽医所为本文的第一产权单位，畜禽重大疫病防控创新团队张琳副研究员、中国农业大学动物医学院研究生李卓琳、汤子澈和中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的韩凌霞研究员为共同第一作者，畜禽重大疫病防控创新团队吴家强研究员和中国农业大学动物医学院张念之副教授为共同通讯作者。本研究获得了国家重点研发计划(2016YFD0500106)、山东省自然基金(ZR2019QC013)、国家自然基金(31830097、32070178)等项目的资助。